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技術(shù)文章

熒光分光光度計的使用條件對分析為重要

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   熒光分光光度計具備固定波長功能、數(shù)據(jù)處理功能、時間掃描功能、重復(fù)掃描功能、視頻顯示功能和譜圖、測定參數(shù)及結(jié)果的打印功能。熒光分光光度計中熒光強度容易受外界因素的影響,如樣品池、激發(fā)光源、溫度、溶液的pH值、溶劑性質(zhì)、其它溶質(zhì)、表面活性劑等都會造成熒光強度的變化。嚴格控制測試條件對熒光分析來說關(guān)重要。
 ?、贅悠窇?yīng)盛在四面透光的石英比色皿(熒光池)中,如果是揮發(fā)性樣品應(yīng)使用帶塞的熒光池。
  ②在熒光分析時,為了得到穩(wěn)定可靠的數(shù)據(jù),一般需要開機預(yù)熱氙燈大約30min。如果儀器光源采用的是閃爍氙燈,預(yù)熱時間可以縮短到10min左右。對某些易感光、易分解的熒光物質(zhì),盡量采用長波長、低入射光強度及短時間光照。
 ?、蹨囟茸兓梢馃晒鈴姸鹊母淖?。通常降低溫度,有利于提高熒光量子產(chǎn)率,熒光強度增大。溫度影響熒光強度的顯著程度因樣品而異,大部分熒光物質(zhì)的熒光強度受溫度影響不大,測試溫度變化不超過±3℃,對測試結(jié)果幾乎無影響。
 ?、墚敓晒馕镔|(zhì)是弱酸或弱堿時,溶液的pH對熒光強度有較大影響。因為弱酸或弱堿在不同酸度中,分子和離子的電離平衡會發(fā)生改變,而熒光物質(zhì)的熒光強度會因其離解狀態(tài)發(fā)生改變。以苯胺為例:在pH=7~12的溶液中會產(chǎn)生藍色熒光,在pH<2或pH>13的溶液中都不產(chǎn)生熒光。再如,維生素B2(核黃素)在430~440nm藍光照射下會發(fā)出綠色熒光,λem為535nm。它在pH=6~7的溶液中熒光強度大,而在pH=11時熒光消失;但在堿性溶液經(jīng)光線照射發(fā)生分解作用或在酸性KMnOt氧化下都會生成熒光強度比維生素B2強得多的黃光素,并可溶于氯。利用此性質(zhì)可提高測定的靈敏度和選擇性。
 ?、莘肿咏Y(jié)構(gòu)中存在ππ共軛的熒光物質(zhì)在性溶劑中,熒光效率顯著增強。溶液表面活性劑的加入能夠顯著提高熒光強度。
 ?、奕鹄⑸浜屠⑸涫侨軇┑膬煞N散射光,應(yīng)注意不要誤把瑞利散射和拉曼散射光譜當做熒光光譜。瑞利散射光波長與激發(fā)光波長相同,拉曼散射與激發(fā)光波長不同,而熒光物質(zhì)的熒光波長與激發(fā)光波長無關(guān),因此可以通過選擇適當?shù)募ぐl(fā)波長將拉曼散射光與熒光分開。在測試時選擇合適的狹縫寬度,或者空白扣除,也可以對散射光的影響進行校正。
 ?、邿晒馕镔|(zhì)分子與溶液中其它物質(zhì)分子之問作用導(dǎo)致熒光強度降低,常見的熒光猝滅劑,如鹵素離子、重金屬離子、O2、硝基化物質(zhì)、重氮化合物等。溶液中的溶解氧也能引起幾乎所有的熒光物質(zhì)產(chǎn)生不同程度的熒光熄滅現(xiàn)象,因此,在較嚴格的熒光實驗中必須除O2。
 ?、鄿y試過程中注意不要肉眼盯著氙燈光源看,以防對眼睛造成損傷。
 ?、醿x器房應(yīng)注意經(jīng)常通風,避免產(chǎn)生的臭氧在室內(nèi)富集。

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